植物原生质体计数

发表时间:2021-06-09 16:21

植物原生质体提供了一个通用的细胞为基础的实验系统。生物大分子如DNA,RNA 和蛋白质可以通过 PEG 钙融合,电穿孔和显微注射等方法被导入到原生质体中。通过瞬时操纵信号转导和代谢途径、转录和翻译,研究细胞自主调节和应答。结合具有丰富遗传资源的模式生物,如水稻、拟南芥等,该体系已广泛用于功能基因组学分析。在这一系列实验过程中,原生质体的提取是基础,后续转化实验中需要调节原生质体悬液浓度。原生质体提取试剂盒可帮助快速高效地获得较纯净的原生质体,JIMBIO CL 计数仪能准确对该悬液精确计数。

1. 材料与方法

1.1 材料及仪器

      水稻种子;营养土;蛭石;光照培养箱;离心机;JIMBIO CL 计数仪或者Jimbio CCplus 计数仪等

      原生质体提取试剂盒(江苏贝瑞利生物科技有限公司)。

1.2 实验方法

  1.2.1 水稻种植:干种子播种,28℃短日照土培 10 天。

  1.2.2 将水稻幼苗的叶鞘(幼茎)切成片,厚度为 0.5-1mm,取 3-5g,用试剂盒提取原生质体。

  1.2.3 得到原生质体悬液后,用 JIMBIO CL 计数仪计数确定浓度。

2. 结果与分析

       图 1. 血球计数板下提取的原生质体图


                                                   图 2. 仪器计数结果


                                              图 3. 仪器计数直方图结果


                                         表 1. 仪器与计数板计数结果对比


从图 1 可看出,经试剂盒提取的原生质体较纯净,无明显杂质,图 2 和图 3显示的计数结果,粒径大小与血球计数板所观察的结果相当,粒径分布正常。表1 将仪器与计数板计数结果进行了对比,可以看出仪器的 CV 值较计数板小,计数更稳定,仪器的计数结果较计数板略高,这是因为提取过程中的除杂不可能完全,会有一些小的杂质颗粒,计数板计数时,已经主观剔除了,这部分占比不大,用户也可自行选区进行计数。


推荐机型:Jimbio CL 或者 Jimbio CC plus


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